Y染色体微缺失检测

一、试剂

1. 1×TE：0.01M Tris，1mM EDTA，pH 8.0；
2. 细胞裂解液：50mM KCl，20mM Tris，2.5mM MgCl₂，0.5%Tween-20，10μg/ml蛋白酶K，pH 8.3；
3. 10×PCR Buffer；
4. Taq^TMDNA聚合酶；
5. 其他：去离子水，dNTPs。

二、方法

（1） DNA提取：

1. 抽取无精子症患者外周血用EDTAK₂抗凝，取50μl置1.5ml管中。
2. 加入1ml1×TE，吹打混匀，9000g离心15秒。
3. 去上清，沉淀再加1ml1×TE，吹打混匀，9000g离心15秒。
4. 重复步骤3）1次。
5. 沉淀用100ml细胞裂解液悬浮，吹打混匀，55℃孵育45分钟，间断摇动。
6. 煮沸10分钟灭活蛋白酶K。

（2） PCR：PCR程序：95℃预变性5分钟；95℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸40秒；扩增30个循环；最后72℃延伸5分钟。

以上成分在冰上混匀。

（3） 电泳：PCR扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯观察分析结果。