为什么在流式细胞术检测时非特异性结合会影响免疫表型分析的结果?

答:非特异性结合(nonspecific binding,NSB)是指在免疫反应中非抗原、抗体的结合。Fc受体结合抗体是导致NSB的重要因素。任何细胞上只要存在未被结合的Fc受体,都可能发生NSB。虽然血浆中含有各种免疫球蛋白,但血细胞上的Fc并未完全被饱和,这是由于血浆中的免疫球蛋白浓度也未饱和。因此,血清不能用于阻断Fc受体的NSB。除了T淋巴细胞和红细胞外,所有的造血细胞均有Fc受体。在一定程度上,高浓度(3mg/ml)的纯化鼠IgG可用于阻断Fc受体的NSB。在选择阻断Fc受体的NSB纯化IgG时,应与荧光素标记抗体一致。若用荧光素标记的羊抗鼠IgG作为二抗,则应选择羊血清纯化IgG。

免疫球蛋白聚集可增加NSB。由于冰冻、复溶和冻干处理,抗体均可出现聚集现象。对于新近购买的抗体,可通过高速离心去除聚集,将离心后的抗体上层液转移至另一瓶或试管中保存。NSB的大小可通过信噪比进行估计。当一种NSB小的抗体以高浓度与细胞反应时,阴性细胞的位置改变较少,阳性细胞能够很明显地分辨。然而,遗憾的是大多数单克隆抗体均有不同程度的NSB,很难达到没有NSB的理想状态。NSB随抗体浓度的增大而增加,但NSB较少的抗体在较宽的浓度范围内仍然仅与抗原决定簇阳性的细胞结合。

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