hVISA指哪类菌株?有分子生物学标志吗?检测金标准是什么?

hVISA指哪一类菌株?有明确分子生物学标志吗?现在检测此类菌株的金标准是什么?

答:hVISA指万古霉素异质性中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin-intermediate S.aureus,hVISA),其呈现对万古霉素低水平耐药与细胞壁增厚相关,无明确的分子标志,以改良菌群分析策略-曲线下面积(modified population analysis profile-area under the curve,PAP-AUC)法作为公认的金标准,操作如下:挑取血平皿上培养过夜的纯菌落,用0.85%的无菌盐水配制成浊度为0.5麦氏单位的菌液,取2ml菌液加入8ml胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)液体培养基,摇匀后,35℃空气浴中振荡培养,24小时后将菌液取出并定义为原液(neat)。用0.85%的无菌盐水将原液分别稀释至10−3和10−6。将每株3种浓度(原液、10−3和10−6)的菌液分别接种至6个浓度的万古霉素BHI琼脂平皿(BHIV0.5、BHIV1.0、BHIV2.0、BHIV2.5、BHIV4.0和BHIV8.0)。室温晾干后于35℃培养,24小时和48小时各观察1次,以Mu3为阳性对照,ATCC 29213为阴性对照。对同一标本相同万古霉素浓度的3个不同稀释度的平皿,进行菌落计数并乘以稀释度,即为该菌株在这一万古霉素浓度下的实际菌落数。利用Graphpad Prism(Graphpad;San Diego,美国加利福尼亚州)软件绘制菌落数log对数值对万古霉素浓度的曲线并计算曲线下面积AUC。同一批次中,将待测菌株的AUC与阳性对照Mu3的AUC进行比较。目前公认的确认标准为:VSSA:AUC待测菌株/AUCMu3比值< 0.9;hVISA:AUC待测菌株/AUCMu3比值为0.9~< 1.3;VISA:AUC待测菌株/AUCMu3比值≥1.3。

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