葡萄糖氧化酶法测血糖

原理

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖,使葡萄糖分子中的醛基被氧化,生成葡萄糖酸及过氧化氢。过氧化氢被耦联的过氧化酶催化放出氧,后者将色原性氧受体4-氨基安替比林耦联酚氧化,并与4-氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。此反应称Trinder反应。参考区间:健康成年人,空腹血清葡萄糖3. 9~6. 1mmol/L(700~110mg/dl)。

试剂

  1. 缓冲液(0. 1mol/L)pH 7. 0,取无水磷酸二氢钠8. 5g及无水磷酸二氢钾5. 3g,溶于800ml蒸馏水中,用1mmol/L氢氧化钠或盐酸调pH至7. 0,然后用蒸馏水稀释至1L。
  2. 酶试剂:取葡萄糖氧化酶1200单位,过氧化酶1200单位,4-氨基安替比林10mg、叠氮钠100mg加上述磷酸缓冲液至80ml左右,调pH至7. 0,再加上磷酸缓冲液至100ml,置冰箱保存,至少可稳定3个月。
  3. 酚试剂:酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色,可先配成50g/dl的溶液,储存于棕色瓶中,用时稀释)。
  4. 酶酚混合试剂:酶试剂及酚试剂等量混合,在冰箱内可存放1个月。
  5. 葡萄糖标准贮存液(100mmol/L):称取标准纯度的无水葡萄糖(MW 180. 16,预先置于80℃烤箱内干燥恒重后,移置于干燥器内保存)1. 802g,以12mmol/L苯甲酸溶液溶解并转移到100ml容量瓶内,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至100ml刻度处,至少放置2小时后方可应用。
  6. 葡萄糖标准应用液(5mmol/L):吸取葡萄糖标准贮存液5ml,置于100ml容量瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。
  7. 抗凝防腐剂:草酸钾6g,氟化钠4g溶解于100ml。0. 1ml可抗凝2ml血液。

操作

取数支16mm×100mm的试管,按表8-3进行操作。

葡萄糖氧化酶法操作步骤

葡萄糖氧化酶法操作步骤

混匀,置37℃水浴中,保温15分钟,分光光度计波长505nm,比色杯光径1. 0cm,以空白管调零,分别读取标准管和测定管的吸光度。

计算

血清葡萄糖计算公式

临床意义

血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定,当这些调节失去原有的相对平衡时,则出现高血糖或低血糖。

生理性高血糖:饭后1~2小时,摄入高血糖食物后,情绪紧张时肾上腺素分泌增加。

病理性高血糖

  1. 内分泌腺功能障碍引起高血糖:胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏,肝中糖原分解和糖异生加强,肌肉、脂肪细胞对葡萄糖利用减少,这些情况血糖可超过正常,临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。如在垂体前叶功能亢进时,生长素或促肾上腺皮质激素分泌过多,或患肾上腺皮质或肾上腺髓质肿瘤时,肾上腺皮质激素或肾上腺分泌过多时,甲状腺功能亢进,嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤等也会导致高血糖。
  2. 颅内压增加:如颅外伤,颅内出血,脑膜炎等。
  3. 由于脱水引起的高血糖。

生理性低血糖:饥饿和肌肉运动;注射胰岛素后;口服降血糖药物后等。

病理性低血糖

  1. 胰岛β细胞增长和肿瘤等,使胰岛素分泌过多。
  2. 对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退,肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
  3. 严重肝病患者,由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖,还有嗜酒精者酒精中毒,肝内NAD用于乙醇的脱氢作用过多,以至NADH/NDA比值增高,可抑制丙羧化酶,从而减弱了乳酸和丙酸的糖异生作用。
  4. 血糖损失过多,如根皮苷引起的肾小管中毒性糖尿。

附注

1.葡萄糖氧化酶仅对β-D-葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为α型,64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋过程。国外有些商品葡萄糖氧化酶试剂盒中含有葡萄糖变旋酶,促进α-D-葡萄糖转变为β-D-葡萄糖。这一过程在极普法测定葡萄糖(速率法)时尤为重要。在终点法中延长孵育时间可达到自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液只要是α型,就必须放置2小时以上(最好过夜),待变旋平衡后方可应用。

2.过氧化物酶的特异性较低,一些还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红素和谷胱甘肽等可与色原性物质竞争过氧化氢,从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢,产生竞争性抑制,使GOD-POD耦联法的测定结果偏低。好在现在的商品试剂盒中都含有抗干扰的成分,能有效地排除上述物质的干扰,在本法的测定条件下,溶血标本血红蛋白浓度达10g/L,黄疸标本胆红素浓度达342μmol/L,均不影响测定结果。氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46. 7mmol/L(280mg/ dl),尿酸浓度达2. 97mmol/L(50mg/dl),肌酐浓度达4. 42mmol/L(50mg/dl),半胱氨酸浓度达4. 1mmol/L(50mg/dl),三酰甘油浓度达5. 65mmol/L(50mg/dl),对测定结果均无显著影响。

3. GOD-POD耦联法可直接测定脑脊液中葡萄糖的含量,但不能直接测定尿液中葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等还原性干扰物质浓度过高,干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。

4.方法学评价 GOD法线性范围至少可达19mmol/L,回收率94%~105%,变异系数批内0. 7%~2. 0%,批间为2%左右,日间为2%~3%。其准确度与精密度都能达到临床要求,操作简便,适用于常规检验。

5.测定标本用血清或以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆。抗凝管的制备:取草酸钾6g,氟化钠4g,加水溶解至100ml。吸取0. 1ml到各支试管中,置80℃烤箱中烤干。该抗凝剂可抗凝2~3ml血液在3~4天内不凝固,并能抑制葡萄糖的分解。

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小程序

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