胰岛组织保存方法

一、组织培养

啮齿类动物的胰岛在组织培养中至少可保存1周,数周后仍能合成胰岛素,对适当的刺激有胰岛素分泌反应。在胎鼠或新生鼠胰腺组织培养中,胰岛可优先分化,复制β细胞。

二、冷藏

冷藏是最简单的保存方法。有报告,消化分散的胰岛组织于小量培养液中4℃可保持63小时,于大量培养液中可保存达101小时,移植给糖尿病大鼠可使糖尿病状态纠正。

三、冷冻保存

各种细胞或组织碎片在液氮(-196℃)中冻存数月或数年后仍能存活。移植物冻存的关键因素是冷却率与复温率,冷冻保存剂以及移去冷冻保护剂时发生的渗透性变化。用17. 5日龄的胎鼠胰腺混悬于2mol/L二甲亚砜中降温至-8℃,再以0. 3℃/min降至-70℃。在室温中融化,用0. 75mol/L蔗糖溶液缓慢地稀释防止渗透性休克发生。将已在-196℃冻存了13周的胎鼠胰腺移植至大鼠肾包膜下,30日内糖尿病状态纠正。张洪德等对新生大鼠、人胎胰组织碎片与胰岛冷冻保存方法做了研究,结果表明以1. 5mol/L二甲亚砜4℃渗透平衡30分钟或以上,以0. 3℃/min速率缓慢降温至-40℃以下,放入液氮中保存,复温采用38℃水浴快速解冻。用0℃Hanks液与培养液成倍稀释逐步释出二甲亚砜,可减少胰岛细胞损伤,提高胰岛细胞活率,并保持较好的功能状态。

Rich等用一种同基因移植模型比较研究了逆转糖尿病所需的最小量冻存胰岛与新鲜胰岛数量,并研究了冻存胰岛的功能与冻存中胰岛的丧失率,结果显示冻存中有21. 5%胰岛丧失,根据逆转糖尿病所需的最小胰岛量来计算,冻存中总的胰岛功能丧失38%。可见目前如何减少冷冻与复苏过程对胰岛的损害尚有待于进一步探讨。

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