胰岛制备物质量监测

人胰岛质量是胰岛移植成功的关键。胰岛质控指标包括胰岛数量,胰岛纯度、活性与功能以及胰岛无菌性。移植前胰岛评估是临床使用前判断移植细胞质量的重要环节。除了排除内毒素、支原体、细菌污染的潜在可能性以外,还要判断胰岛细胞的活性和潜能。移植后功能预测也是目前研究致力发展的方向。

胰岛鉴别与纯度

双硫腙(dithizone,DTZ)染色是鉴别胰岛和评价胰岛纯度的一种简便方法。双硫腙是一种二价金属离子的螯合剂,可与锌、铜、铅等螯合,形成猩红色复合物。人和动物(豚鼠除外)的胰岛β细胞均含锌,因此DTZ可使胰岛β细胞着色,而其他胰岛细胞和非胰岛组织不着色,通过显微镜可直接进行计数或手挑,新鲜分离的胰岛和培养胰岛均可着色。DTZ染色是目前应用最广的胰岛活体染色的方法。胰岛移植前质量评估要求胰岛纯度>80%。

胰岛数量与体积

健康成人胰腺重约50g,包含大约100万个胰岛,经过分离和纯化,通常只能获得20万~50万个胰岛,纯度50%~80%。移植的胰岛数量通常以胰岛当量(IE)表示,是胰岛细胞计数国际通用单位。一个IE相当于一个直径150μm的胰岛。采用DTZ染色,可正确计数胰岛。计数胰岛同时应考虑胰岛的大小,以成人胰岛为例,根据国际胰岛移植登记处资料:按胰岛直径类别计数染色的胰岛,<50μm者不计,>350μm者不再细分,以各直径类别与换算指数换算成直径150μm的胰岛当量(IE)与平均体积(下表)。

胰岛大小、体积与胰岛当量的换算

胰岛大小、体积与胰岛当量的换算

根据第4届国际胰腺与胰岛移植大会人胰岛质控研讨会的意见,临床胰岛移植的胰岛质控指标应符合下述最小的需要量:胰岛数量8000IE/kg体重,胰岛纯度>80%,活性>80%,终体积<7ml,胰岛葡萄糖灌流显示胰岛素分泌呈双相反应。

胰岛活性与内分泌功能

胰岛活性

胰岛活性是决定胰岛移植效果的关键因素,采用吖啶橙(acridine orange,AO)与碘化丙啶(propidium iodine,PI)荧光染色,不仅可以鉴别活性与无活性全胰岛,且可鉴别胰岛内活性与无活性成分。AO为浸润性染料,可侵入活细胞发出绿色荧光,PI为排斥性染料,不能进入活细胞,与已死亡或正在死亡的细胞的核酸结合,发出红色荧光。故AO-PI双色荧光染色对细胞活性的评估较常用的台盼蓝染色明显优越。胰岛移植前质量评估要求荧光染色鉴定活性>80%。

胰岛分泌功能

胰岛素释放试验是常用的胰岛功能检测方法,现认为胰岛葡萄糖灌流试验是胰岛功能体外测定的标准方法,它可提供葡萄糖介导的胰岛素释放的动态改变,并计算刺激指数,鉴定其分泌能力。移植后功能预测的最佳实验是部分胰岛移植入无胸腺免疫缺陷糖尿病小鼠后糖尿病的改善。目前的研究致力于发展各种评估胰岛细胞的实验方法,包括凋亡、ATP和氧的消耗、线粒体膜电位研究。

胰岛无菌性

胰岛培养应排除内毒素和支原体、细菌等各种微生物污染。胰岛移植前质量评估要求革兰染色阴性。

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