1型糖尿病（T1DM）的发病机制中有自身免疫包括细胞免疫和体液免疫机制的共同参与，患者血清中可检出多种针对胰岛细胞及其细胞成分的自身抗体。这些抗体的检测在T1DM的发病机制研究、分型诊断、治疗、疗效监测以及预测中有重要作用。
谷氨酸脱羧酶抗体预测自身免疫性T1DM
谷氨酸脱羧酶（GAD）是抑制性神经递质——γ-氨基丁酸（GABA）的合酶，在人脑及胰岛中均有表达。GAD分子存在两种形式（65kD和67kD），这两种蛋白质由不同的染色体的不同基因编码（65kD的GAD基因位于第2号染色体，67kD 的GAD基因位于第10号染色体）。两者有70%的氨基酸序列同源性，免疫源性也基本相同。GAD主要位于细胞的胞质中，在胰岛内具有抑制生长抑素和胰高血糖素分泌的作用，并可调节胰岛素的分泌及胰岛素原的合成。GAD的表达有明显种族差异，大鼠可表达两种GAD而人类胰岛细胞仅表达65kD或以表达65kD的GAD为主。
GAD是T1DM的自身抗原，而且被认为是始动靶抗原。GAD抗体（GADAb）除主要见于T1DM外，亦见于正常人、糖尿病亲属、T2DM、妊娠糖尿病、Graves病、甲减和类风湿关节炎等患者。在T1DM，GADAb可于发病前10年测出，且在此期间呈高滴度持续存在；在诊断后的10～20年仍可测出抗体，仅滴度有所下降。新发T1DM患者中，GADAb的阳性率为74%，病程长者为67%。T2DM患者中，GADAb的阳性率约为10%，且在发生磺脲类降糖药继发性失效的T2DM患者中有更高的阳性率（25%）。在正常人中，有2%左右的阳性率。在T1DM一级亲属中的阳性率为15%，其中1/3在6～8个月发展成T1DM。GADAb水平与血清C肽水平呈负相关。
检测GADAb的临床意义有：①可作为T1DM预测的指标；②作为成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）的预测和早期诊断指标；③用于T1DM的免疫预防监测。国内外已有人报道免疫治疗预防T1DM的动物和临床试验，T1DM病情好转与血清GADAb转阴有相关关系，GADAb是目前疗效监测的较好指标。重组的人GAD（rhGAD）已用于GAD抗体的测定。检测GAD抗体有免疫沉淀酶活性法、放射免疫法（125I标记或35S标记）和酶免疫法等，目前以放免法较敏感、特异而实用。检测天然或重组GAD抗原均有一定难度。GADAb和ICA两种抗体联合检测具有互补性，特别在LADA，因为GADAb和ICA不都是一致出现的。T1DM 者GADAb阳性，但ICA可为阴性。T1DM的儿童患者，往往仅出现一种自身抗体（ICA或GAD-Ab或其他抗体）。但GADAb有更大的诊断价值。其原因有：①GADAb较ICA有更高的敏感性和特异性；②GADAb可在发病前较早被检出，并于诊断后长期稳定存在；③GADAb的检测方法相对简便，易于推广。
胰岛细胞抗体早期预报自身免疫性T1DM
ICA是针对胰岛细胞内多种抗原的一组抗体。常用免疫沉淀化学法检测。国际标准化ICA阳性血清不易获得，进口ELISA试剂盒所测正常对照组阳性率较高。
ICA能早于T1DM发病前8年被检测出来，提示可作为早期预报指标，在新发现T1DM中，ICA阳性率平均为70%左右，后随病程延长而降低，5年后降至20%，10～20年后降至5%～10%，可能与抗原刺激减少有关。在T2DM中，ICA阳性率较低（约5%）。在正常人群中仅有0.1%～0.2%的阳性率，在T1DM的一级亲属中阳性率为2%～5%，故在高危人群中筛查ICA可作为预测T1DM的指标。ICA具有细胞毒性作用，杀伤胰岛β细胞还依赖于抗体的介导。ICA阳性提示以后可产生严重的β细胞损害，ICA是T1DM的免疫标志物。T2DM者无论男女，也无论病期，出现高滴度的GADAb和ICA阳性反应，均是提示其进展为胰岛素依赖的高危信号。
IA-2和IA-2β抗体预测自身免疫性T1DM并协助分型
这两种自身抗原及其抗体在T1DM发病机制、诊断、预测和防治中的作用正逐渐得到重视。IA-2（insulinoma associated protein 2）和IA-2β均是Ⅰ型跨膜糖蛋白，都由一胞外结构域、单一跨膜结构域和一胞内结构域组成，在两者胞外结构域中存在一特有的半胱氨酸富含区，在其胞内结构域中均具有蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）催化功能域高度同源的保守区域。两者是受体型PTP超家族的新成员。IA-2与IA-2β高度同源，两者全长具有42%的一致性，在胞内结构域有74%的同源性。两者关系类似于GAD65和GAD67。来自人胰岛素瘤差减文库的IA-2 cDNA序列与Rabin等克隆到的胰岛细胞抗原（ICA）512 cDNA序列几乎完全一致，差别主要在于ICA512 cDNA 2816位鸟苷酸和IA-2 cDNA的424、522及1089位胞苷酸。由于ICA512 cDNA阅读框架较短，故ICA512分子相对于IA-2较小，被认为是IA-2蛋白分子的一个片段。phogrin（phosphatase homologue in granules of insulinoma）是近年来用分子生物学技术得到的另一种重组蛋白。phogrin与来自人胎脑cDNA文库的IA-2β很可能是不同组织来源的同一分子，两者一致性大于90%。
主要有两种检测方法：①ELISA，因为此法测定过程中可能会破坏抗原构象，故灵敏度较低；②放射配体分析法（RLA），它仅需7μl血清，且可半自动化操作，省时省力，适于大规模筛查。Kawasaki等还以IA-2和phogrin两者胞内结构域构成的嵌合分子作为抗原进行RLA测定，其优点在于可一次性检出IA-2或phogrin抗体阳性个体。
IA-2、IA-2β及其抗体检测对T1DM 的应用价值：①预测T1DM的发生，确定高危人群。IA-2Ab联合GADAb及IAA被认为是预测T1DM最可靠的免疫学标志。两种以上抗体阳性具有68%的阳性预测价值，80%敏感性和100 %特异性。②有助于糖尿病的正确分型及指导治疗。IA-2Ab和IA-2βAb在新诊T1DM患者中阳性率高，而在T2DM患者中出现率低（约2%），故可作为T1DM的诊断依据，用于两者的鉴别诊断。IA-2Ab在T2DM患者血清中出现可能反映自身免疫性胰岛炎的存在，该个体很可能会进展为LADA。但由于IA-2Ab在LADA患者中出现频率较低（6%～12%），因而认为IA-2Ab不能作为LADA的临床前免疫学指标。③在T1DM早期防治中可能发挥作用。IA-2和IA-2β可能可诱导特异性免疫耐受，阻断T1DM前期个体的免疫损伤过程，从而预防临床糖尿病的发生。
羧基肽酶-H抗体测定诊断LADA
羧基肽酶-H（carboxypeptidase-H autoantibodies，CPH）抗体是1991年发现的一种胰岛自身抗原，分子量为52kD，分布于胰岛和多种内分泌细胞中，约80%存在于胰岛β细胞中。它是与肽类激素和神经递质合成有关的一种糖蛋白，以与膜结合性和可溶性两种方式存在。CPH不仅可催化胰岛素原向胰岛素的转化，而且近年的研究显示CPH抗体虽然对于经典的T1DM的诊断无特殊价值，但在LADA的诊断中却发挥着重要作用，其对LADA的诊断意义优于IA-2Ab和IAA。此外，CPH还参与了T2DM的发病，CPH抗体阳性的T2DM患者具有低体重、酮症倾向和胰岛功能差的特点，且反映代谢综合征的各项指标的水平均较低，其临床特征和胰岛功能介于GADAb阳性和两种均阴性的T2DM患者之间。
抗胰岛素抗体诊断胰岛素自身免疫综合征
抗胰岛素抗体（insulin antibody，IAA）有两种，一种与糖尿病的发病有关，在糖尿病发病之前就存在，为抗胰岛素自身抗体；另一种是糖尿病发病之后，使用了外源性胰岛素造成的。IAA首先发现于胰岛素自身免疫综合征患者，目前新发现的T1DM患者的阳性率可为40%～50%，经胰岛素治疗的患者其阳性率更高。研究认为胰岛素分子作为抗原参与T1DM的自身免疫过程，IAA在T1DM发病的自身免疫机制中起一定的作用。但IAA不是糖尿病的特异性抗体，它在胰岛素自身免疫综合征和甲状腺疾病中也可出现，甚至33%的正常人群也为阳性。故单纯IAA阳性对进展为T1DM的预测价值较低，单纯的IAA阳性不能作为T1DM的标志，仅表明有进展为糖尿病的自身免疫倾向。
多种抗体联合检测可大大增加对T1DM的预测价值。T1DM一级亲属同时检测GADAb、ICA和IAA：两种抗体同时阳性者，发生T1DM的危险性3年内为39%，5年内为68%；3种抗体阳性者，5年内发生T1DM的危险性估计高达100%。与ICA和IAA比较，GADAb与进行性胰岛β细胞功能损害的相关性更好。目前可用RIA和ELISA法测定外周血IAA。IAA在胰岛自身抗体检测中，敏感性最低。（刘玮雷 闽湘）
