答:将制备的红细胞膜样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),以 PAGE为载体,在电场作用下,膜蛋白能分离出各种区带。根据样品中各蛋白相对分子质量的不同,分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱,从而求得各膜蛋白组分百分率,此即红细胞膜蛋白电泳分析。红细胞膜是双层磷脂结构,其间镶嵌着多种膜蛋白。膜蛋白有包埋在脂质双分子层中的整合蛋白以及存在于膜内侧的细胞膜骨架蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳,可发现整合蛋白主要包括带3蛋白(band 3)和血型糖蛋白。外周蛋白的固定较松散,在高盐、低盐或高pH的情况下即可分离。主要包括收缩蛋白(spectrin,带1、2蛋白)、锚蛋白(ankyrin,带2.1蛋白)、带4.1蛋白(band 4.1)、带4.2 蛋白(band 4.2,pallidin)、带 4.9 蛋白(dematin)、肌动蛋白(actin,带5蛋白)及少量其他蛋白如2.2、3a、6及7等。

这些蛋白去除后血影的形状变得不规则,膜蛋白的流动性增强,被称为 “膜骨架蛋白”。正常人红细胞膜蛋白经SDS-PAGE电泳后依次出现下列主要区带:区带1、2(收缩蛋白)、区带2.1(锚蛋白)、区带3(阴离子通道)、区带4.1、区带4.2、区带4.5(葡萄糖运转蛋白)、区带4.9、区带5(肌动蛋白)、区带6(3-磷酸甘油醛脱氢酶)和区带7等(图)。各实验室可根据自己的条件制定参考范围。许多遗传性和获得性溶血性贫血都伴有红细胞膜蛋白异常,可检出收缩蛋白等含量减低或结构异常。本试验可直接反映红细胞膜蛋白的缺陷,有助于溶血性贫血病因查找,是红细胞膜缺陷性疾病诊断的主要依据。

正常人红细胞膜蛋白经SDS-PAGE电泳结果示意图

正常人红细胞膜蛋白经SDS-PAGE电泳结果示意图

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