为什么角膜病毒核酸扩增检测存在假阴性结果?

答:核酸扩增检测(NAAT)是以病原体核酸为模板,在加入特异性引物、高温聚合酶、脱氧核糖核酸等原料的情况下,实现体外高效复制DNA的技术。其特点为可使微量的病原体核酸大幅扩增而在体外通过仪器进行检测。目前,NAAT已广泛用于眼部标本中各种病毒、细菌、衣原体、真菌等的检测。但该技术也存在一定的假阴性结果情况,其原因主要为以下四个方面:①仪器因素:NAAT对于仪器的依赖性很高,扩增仪由于温控不准导致的孔间差以及离心机离心力不够导致模板核酸不能有效分离,均可引起假阴性;②试剂质量:核酸扩增成功与否试剂质量至关重要,如细胞裂解、模板抽提、引物位点选择、高温聚合酶活性等,任一环节出现问题都会引起假阴性结果;③核酸模板:核酸模板在扩增区出现断裂、蛋白黏附、空间位阻等问题时也会引起扩增失败造成结果的假阴性或定量不准确;④操作人员素质:核酸扩增实验环节较多,对每一环节的操作都有较高要求,少加、漏加试剂、离心不充分、循环参数设计错误、RNA抽提降解、反转录失败等都能造成假阴性现象;⑤其他:样品不适当的采集、运输及保存也可引起结果的假阴性,如标本采集需选择病毒复制的高峰期进行,若在潜伏期或恢复期采集很可能出现阴性结果。

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